Alrededor del 40% de los linfomas no Hodgkin en adultos se clasifican como Linfomas Difusos de Células Grandes B (LDCGB), lo que hace que esta sea la forma más común de la enfermedad en adultos.
Esta enfermedad se presenta en los centros germinales de los ganglios linfáticos, donde las células B proliferan, y la mayoría de los linfomas se pueden clasificar en uno de los tres sub-tipos: Linfoma difuso de célula grande tipo centro germinal (CGB), tipo células B activada (ABC) y tipo primario mediastínico (PM).

La secuenciación del genoma entero y otros análisis moleculares, han identificado un número de genes frecuentemente mutados en uno o más subtipos, incluyendo el proto-oncogén BCL6 y un activador transcripcional, MEF2B.

MEF2B es un miembro de una familia de factores de transcripción caracterizado por dos dominios N-terminales altamente conservados, implicados en la unión al ADN y la dimerización, de manera respectiva; y C-terminales que son muy divergentes en secuencia. Estos se expresan en dos isoformas A y B con diferentes terminales C.

Se sabe que controlan la expresión de un número de genes relacionados con el factor de músculo específico y el crecimiento, y son regulados por la unión de cualquiera de un co-represor, CABIN1, o una histona deacetilasa.

Un grupo de investigadores dirigido por Riccardo Della-Favera de la Universidad de Columbia, Nueva York, NY, EE.UU,  han explorado los efectos funcionales de las mutaciones MEF2B en el linfoma difuso de células grandes B.

Examinaron la secuencia codificante de este gen a partir de 111 casos de LDCGB; 23 líneas celulares, y 35 casos de linfoma folicular, que se pueden transformar en LDCGB.
Identificaron 11 variantes somáticas en estas secuencias, y combinaron su información con otras mutaciones publicadas para dar un conjunto completo de 39 variantes.

La mayoría de éstas (27 o 69%) eran mutaciones de sentido erróneo, ocho eran mutaciones con cambio y cuatro mutaciones sin sentido; la mayoría afectó a los dominios N-terminales.

Los investigadores estudiaron el patrón de expresión MEF2B en el tipo centro germinal normal (GCB) de células B, aisladas de amígdalas humanas, y descubrieron que se co-expresó con el proto-oncogén BCL6; también se observó una correlación entre los patrones de expresión de estos genes en otros fenotipos de células B.

Della-Favera y sus compañeros de trabajo  identificaron regiones MEF2B de unión potenciales, en el promotor BCL6, por lo que postularon que el MEF2B podría regular al BCL6.

Pusieron a prueba esta hipótesis mediante inmuno-precipitación de cromatina (ChIP) y demostraron que el MEF2B se unía a esta región del promotor y que esto aumento la expresión de BCL6.

Por otra parte, el silenciamiento de MEF2B en células LDCGB con ARN de horquilla corta hacia expresiones sub-reguladas de Bcl-6, mientras que el silenciamiento de BCL6 no tuvo efecto sobre MEF2B.

Se encontró también que era necesaria la expresión de MEF2B para la proliferación del tipo germinal de células B centro derivadas, y que su pérdida podría ser sólo parcialmente compensada por el aumento de las concentraciones de Bcl-6.

Seguidamente, los investigadores examinaron el efecto de cada mutación MEF2B conocida y asociada a LDCGB, en el promotor BCL6 a través de la actividad de unión y transcripción de la proteína MEF2B.

Se encontró que cada una de las mutaciones que se asignan a la región N-terminal de esta proteína aumenta su actividad de transcripción y por lo tanto la expresión de Bcl-6.

Una mezcla equimolar de tipo salvaje y mutante MEF2B tenía el mismo efecto que la proteína mutante pura, lo que indica que esto era un efecto dominante.
El análisis de enriquecimiento de genes de células de linfoma de pacientes con LDCGB primaria con y sin mutaciones MEF2B, mostró que la expresión de los genes dirigidos por Bcl-6 se había reducido en los casos en que se mutó este gen, lo que indica que la actividad de transcripción de Bcl-6 había aumentado.

A continuación, los investigadores utilizaron gráficos moleculares para investigar el efecto de estas mutaciones y sugirieron que algunos podrían afectar la unión de MEF2B a su co-represor, CABIN1, mientras que otros podrían alterar su capacidad para formar dímeros.

Estas predicciones se probaron utilizando ensayos de co-inmunoprecipitación, y se encontraron seis sustituciones de aminoácidos N-terminales para evitar la unión de CABIN1 y por lo tanto se reclutó CABIN1 al promotor BCL6.

Por el contrario, muchas de las mutaciones observadas en el dominio C-terminal de MEF2B se prevé truncan la proteína y eliminan sitios de consenso para la fosforilación o para la unión de la pequeña modificadora semejante a la ubiquitina, SUMO.
La unión de CABIN1 al terminal N de MEF2B, y la fosforilación y SUMOilación de su terminal C, son todas conocidas por regular su actividad, por lo tanto, la prevención de una de estas interacciones tendrá el efecto regulación de la proteína.

Tomados en conjunto, estos resultados sugieren que las mutaciones somáticas en MEF2B desregularizará la actividad de su producto proteico, y que esto contribuye al desarrollo del linfoma difuso de células grandes B, por lo que esta proteína puede ser una diana válida de los medicamentos para el tratamiento de esta enfermedad.

Referencia:

Ying, C.Y., Dominguez-Sola, D., Fabi, M., Lorenz, I.C., Hussein, S., Bansal, M., Califano, A., Pasqualucci, L., Basso, K. and Dalla-Favera, R. (2013). Mutaciones MEF2B conducen a la expresión desregulada del oncogén BCL6 en linfoma grande difuso de células B . Nature Immunology, Publicado en Internet antes de imprimir el 25 de Agosto del 2013. doi: 10.1038/ni.2688.